İmmün kontrol noktası PD-L1 proteinini bloke edici monoklonal antikorların geliştirilmesi

Abstract

Programlı Ölüm Ligandı 1 (Programmed Death-Ligand 1, PD-L1), immün kontrol noktaları (Immune Checkpoint) moleküllerinden biridir. PD-L1, aktif T hücrelerinde ifade edilen Programlı Hücre Ölümü (PD-1) reseptörü ile etkileşerek T hücre aktivasyonunu sonlandırmakta görev alır ve periferdeki immün yanıtları düzenleyerek otoimmüniteyi engeller. Tümör hücrelerinde PD-L1, aktive T hücrelerindeki PD-1 ile etkileşime girerek tümöre karşı bağışıklık tepkisinin azalmasını sağlayan inhibitör sinyaller oluşturur. Bu sebeple, tümör hücrelerindeki PD-L1'in bloke edilmesi çeşitli tümörlere karşı önemli bir terapötik etkiye sahiptir. Bu tez çalışmasında, PD-L1'i bloke edici monoklonal antikorlar geliştirmek hedef edinilmiştir. PD-L1'i bloke edici monoklonal antikorların geliştirilmesi için klasik hibridoma teknolojisinden faydalanıldı. Bu bağlamda, fareler insan PD-L1 proteini ile bağışıklandı. Bağışıklanan farenin B hücreleri ile fare myelom hücreleri füzyon edildi ve füzyon sonrası oluşan hücrelerin seçilimleri gerçekleştirildi. Seçilim sonrası antikor üretebilen hibrit hücre hatları oluşturuldu. Geliştirilen hibrit hücre hatlarının ürettiği monoklonal antikorların, insan PD-L1 proteinini bloke edici aktivitelerinin belirlenmesine yönelik araştırmalar gerçekleştirildi. Buna ek olarak, geliştirilen monoklonal antikorların diğer immün kontrol noktası proteinleri ile çapraz reaksiyonları ve sıçan, fare, köpek, cynomolgus maymunu gibi farklı türlerin PD-L1 proteinlerine karşı etkileşimleri de ele alınmıştır. Bu çalışma sonucunda, PD-L1'i bloke edici antikorlar geliştirilmiştir. Geliştirilen monoklonal antikorların terapötik değer taşıdığı ve ileri araştırmalar sonrasında ilaç endüstrisine devredilebileceği düşünülmektedir.Programmed Death-Ligand 1 (Programmed Death-Ligand 1, PD-L1) is one of the immune checkpoint molecules. PD-L1 is involved in terminating T cell activation by interacting with the Programmed Cell Death (PD-1) receptor expressed on activated T cells and prevents autoimmunity by regulating peripheral immune responses. In tumor cells, PD-L1 interacts with PD-1 in activated T cells to generate inhibitory signals that reduce the immune response against the tumor. Therefore, blocking PD-L1 in tumor cells has an important therapeutic effect against various tumors. In this thesis study, the aim was to develop PD-L1 blocking monoclonal antibodies. In this study, classical hybridoma technology was used to develop monoclonal antibodies that block PD-L1. In this regard, mice were immunized with the human PD-L1 protein. Myeloma cells and B cells of the immunized mouse were fused, and the cells formed after the fusion were selected. Hybrid cell lines capable of producing antibodies after selection were established. Investigations were carried out to determine the human PD-L1 protein blocking activities of monoclonal antibodies produced by the developed hybridomas. In addition, the cross-reactions of the developed monoclonal antibodies with other immune checkpoint proteins and their interactions against PD-L1 proteins specific to different species such as rat and dog were also analyzed. As a result of this study, PD-L1 blocking antibodies were developed. It is thought that the developed monoclonal antibodies have therapeutic value and can be transferred to the pharmaceutical industry after further research.