Anti-HBV antikorlar kullanılarak anti-idiyotip antikor üretimi ve aşı geliştirme çalışmaları

Abstract

Bu çalışmada, hibridoma teknolojisi kullanılarak HBsAgM taklit eden anti- idiyotip monoklonal antikorlarının elde edilmesi amaçlandı. Fareler, (6A5) anti-HBV fare monoklonal ve anti-HBV keçi poliklonal antikorları ile bağışıktandı. Füzyondan sonra, IgM izotipinde anti-id-HBsAg 6C9 ve 6H9 monoklonal antikorları elde edildi ve antikorlar S-300 jel filtrasyon kolon kromatografısi ile saflaştınldı. Anti-id 6C9 ve 6H9 antikorları ile bağışıklanan fare gruplarında, hem antijene hem de BSA'ne spesifik im m ün yanıtın oluştuğu gözlendi. Farelerin serumlarında sadece HBsAg spesifik immün yanıt oluşturabilmek için anti-id 6C9 antikoru distile suya karşı diyaliz edilerek basit bir yöntemle saflaştınldı. Anti-idiyotip antikorun saflığı SDS- PAGE ile kontrol edildi ve jel üzerinde BSA bandı görülmedi. Bu basit protokolün izlenmesiyle yüksek düzeyde saf bir antikor elde edildi. Anti-id 6C9 saf antikoru farklı dozlarda (10 (ig. 25 u.g, 50 ug, 100 u.g) ve Flepatit B aşıları (Gen Flevac B Pasteur ve Engerix) 1 pg dozda farelere uygulandı. Fareler üzerinde anti-HBsAg antikor yanıtı karşılaştırmalı olarak incelendi. Antikor miktarının arttırılmasıyla, anti-id 6C9 antikoru ile immünizeli grupta HBsAg ve BSA*ne karşı spesifik antikor yanıtın arttığı tespit edildi. Anti-id 6C9 antikorunun hem HBsAg ve hem de BSA üzerinde genel bir epilopu tanıdığı düşünüldü. Sadece HBsAg'ne özgü immün yanıt elde edebilmek için anti-id 6C9 antikorunun Fab fragmanları elde edilerek değişik konsantrasyonlarda İarelere enjekte edildi. Ancak bu deney grubundaki farelerden antikor yanıtı alınamadı. Anti-id 6C9 antikorunun saflaştırılmasından sonra farklı saflaştırma koşullarının antikor spesifikliğine olan etkisi incelendi. Distile suya karşı diyaliz işleminin antikorların bağlanma özelliklerini in vitro olarak değiştirdiği, bununla beraber farelerin anti-id 6C9 antikorları ile bağışıklanmasınm, antikorun antijeni taklit etme aktivitesini in vivo olarak değiştirmediği gözlendi.In this study, production of anti-idiotype monoclonal antibodies mimicking HBsAg was aimed by means of hybridoma technology. Mice were immunized with (6A5) anti-HBV mouse monoclonal and anti-HBV goat polyclonal antibodies. After the fusion, IgM isotype anti-id-HBsAg 6C9 and 61 19 monoclonal antibodies were produced and purified by S-300 gel filtration column chromatography. In mice groups immunized with anti-id 6C9 and 6H9 antibodies, both antigen and BSA specific immune response were obtained. In order to develop only HBsAg specific immunity in mice sera, anti-id 6C9 antibody was purified by simply dialysing of antibody against distilled water. The purity of anti-idiotype antibody was controlled by SDS-PAGE and no BSA band was detected on the gel. By following this simple procedure, highly pure antibody was obtained. Anti-id 6C9 antibody in high purity at different doses (10 (.ig. 25 jig, 50 (,ig. 100 u,g) and hepatitis B vaccines (Gen Hevac Pasteur and Engerix-1 u.g) were injected into mice and anti-HBsAg antibody response was followed in mice. In anti- id 6C9 antibody immunized group, HBsAg and BSA spesific antibody responses increased with the increasing dose of antibody. It was thought that anti-id 6C9 antibody recognizes a general epitope on both HBsAg and BSA. For only HBsAg specific immune response, Fab fragments of anti-id 6C9 antibody was injected into mice at different concentrations. However, in this group, antibody response was not obtained. After purification of anti-id 6C9 antibody, the efficacy of different purification conditions on antibody specificity was investigated. It was determined that dialysing against distilled water changed binding properties of antibodies in vitro. However, when mice were immunized with anti-id 6C9 antibodies, the antigen mimicking activity was not effected in vivo.