Hepatoselüler Karsinomada Çoklu-Kinaz İnhibitörleri Etkinliğinin Plexin C1 Zemininde Pre-Klinik Değerlendirilmesi

Abstract

Projenin amacı PLXNC1?in hepatoselüler karsinomada etkili olduğu sinyal yolaklarını ve HCC tedavisinde kullanılan çoklu-kinaz inhibitörlerine yanıttaki rolünü araştırmaktı. Bu kapsamda ilk olarak, Hep3B ve PLC/PRF/5 hücrelerinin PLXNC1 baskılanmış ve kontrol klonları oluşturuldu. PLXNC1 baskılanmış shPLXNC1 klonlarının düşük proliferasyon hızı ve artmış migrasyon ve invazyon kapasitesi gösterildi. Yine, shPLXNC1 klonlarının çoklu-kinaz inhibitörlerine ve anoikise direnç gösterdiği saptandı. PLXNC1 yolağı altında bulunan kofilin fosforilasyonunun shPLXNC1 hücrelerinde azaldığı ve PLXNC1 varlığında ligandı SEMA7A uygulanan hücrelerde kofilin fosforilasyonunda artış belirlendi. İntegrin ß1 ligandı da olarak SEMA7A?nın hücrelerde FAK ve ERK1/2 fosforilasyonuna neden olduğu gözlemlendi. LIMK/Kofilin fosforilasyonunun üst düzenleyicileri olarak ROCK1/2 ve PAK1?in rolleri inhibitörleri uygulanarak araştırıldı ve Hep3B hücrelerinde ROCK1/2 yolağının aktif olduğu gösterildi. Ek olarak, PLXNC1?in SEMA7A varlığında HCC hücrelerinde RAS-GAP aktivitesi gösterdiği saptandı. PLXNC1?in HCC hücrelerindeki bağlanma partnerleri proteinin aşırı ifade edildiği koşullarda geliştirmiş olduğumuz anti-PLXNC1 antikoru ile immün-çöktürmeye tabi tutulan protein lizatlarının kütle spektrometrisi ile analizi sonucu gelen aday proteinler arasından seçilerek araştırıldı. PLXNC1?in NALP2 ve MUC13 proteinleri ile etkileştiği immün çöktürme yaklaşımıyla doğrulandı. PLC/PRF/5 shPLXNC1 ve kontrol hücreleriyle BALB/c nüde farelerde geliştirilen tümör ksenogreftlerinde HCC hücrelerinin çoklu-kinaz inhibitörleri Sorafenib, Lenvatinib ve Regorafenib?e karşı yanıtları PLXNC1 varlığı ve yokluğu koşullarında araştırıldı. Her üç uygulamada da shPLXNC1-PLC hücre klonları ile oluşturulan fare tümörlerinde tümör hacmi azalmakta olup, buna karşın floresan şiddet yoğunluğu artmakta ve apoptotik hücre ölüm oranı azalmaktaydı. Bu veriler, PLXNC1 yokluğunda hücrelerin çoklu-kinaz inhibitörlerine direnç gösterdiğini ortaya koymuştur. Çalışmanın bulguları PLXNC1?in hepatokarsinogenezde rol aldığına ve HCC tedavisinde kullanılan çoklu-kinaz inhibitörlerinin klinik yönetiminde kullanılabileceğine işaret etmektedir.