Rhodobacter Capsulatus bakterisinde ubikinol oksidazın inaktivasyonu

Abstract

Gram-negatif fakültatif fotosentetik bakteri Rhodobacter capsuîatus ki&ojı^ havuzundan sonra dallanan iki farklı metabolik yolu kullanarak solunumla büyüyebilmektedir. Temel metabolik solunum yolunda elektronlar sitokrom bc\ kompleksi, sitokrom C2İ£y ve son elektron alıcısı olarak sitokrom cbb3 oksidaza iletilmektedir. Diğer metabolik yol ise elektronların kinon havuzundan sonra herhangi bir aracı olmaksızın ubikinol oksidaza (Qox) transfer edildiği alternatif solunum yoludur. Bu çalışmada alternatif ubikinol oksidaz solunum yolunun işlevselliği bozulduğunda; yeni tipteki elektron taşıyıcılarının sitokrom cbb$ oksidaz solunum yolundaki işlevselliğinin incelenebileceği, farklı Qox kromozomal knockout mutant soyları elde edildi. Bu kromozomal knockout mutantlann eldesi, ubikinol oksidazı kodlayan cydAB yapısal genlerinin inaktivasyonu ile başarıldı. Ubikinol oksidaz yapısal genlerinin (cydAB) inaktivasyonunda gentamisin markırından yaralanıldı. Oluşan inaktif cydAB genini içeren pOZİ plazmitinden 2.7-kb büyüklüğündeki cydABGram-negative facultative photosynthetic bacterium Rhodobacter capsulatus* can grow through respiration using two different metabolic pathways that are branched after the quinon pool. In the main respiratory chain, electrons are first transported to cytochrome bc\ complex, then to cytochrome c2/cy and finally to cytochrome cbfa oxidase, the last electron acceptor. The other metabolic pathway is an alternative respiration pathway in which electrons are transported from the quinon pool to the ubiquinol oxidase (Qox) irrespective of any electron carrier. In order to characterize respiratory function of the novel electron carriers, several chromosomal knockout Qox" mutants which eliminated the alternative respiratory pathway were obtained in this bacterium. To construct ubiquinol oxidase chromosomal knockout mutants, inactivation of cydAB genes encoding ubiquinol oxidase was achieved. Structural cydAB genes were inactivated using a gentamicin marker. Cloning 2.7-kb cydAB