Kersetin'in malignant mezotelyoma hücre döngüsü ve hücre ölümüne etkisi

Abstract

Çalışmamızda, besin kaynaklı bir bileşik olan kersetinin tek ve kemoterapideyaygın olarak kullanılan cisplatin ile kombinasyonu, mezotelyoma hücre hatlarının(SPC111 ve SPC212) proliferasyonuna, döngüsüne, ölümüne etkileri, doza vezamana bağlı olarak araştırılmıştır. Kersetin'in; 0-100µM, cisplatinin; 0-50µg/ml'likdozları ve kombinasyonlarının 0-96. saatlerdeki etkisi incelenmiştir.Hücre proliferasyon analizlerinde, kersetin SPC111 hücre hattında 50µM'ınaltındaki dozlarda hücre proliferasyonunu indüklediği, 50 ve 100µM'lık dozlarındayavaşlattığı, SPC212 hücre hattında 10, 50 ve 100µM dozlarında zamana ve dozabağımlı olarak hücre proliferasyonunu engellediği gözlenmiştir. Cisplatin'in 5, 10 ve50µg/ml'lik dozlarda, her iki hücre hattında zamana ve doza bağımlı olarak hücreproliferasyonunu yavaşlatıcı ve/veya durdurucu etki gösterdiği belirlenmiştir. 5µg/mlCis+50µM Qu ve 10µg/ml Cis+50µM Qu kombinasyonlarının her iki hücre hattında72. saatte prolifersyonu inhibe ettiği tespit edilmiştir. Hücre döngüsü analizlerinde,100µM'lık kersetin dozu SPC111 hücre hattında 48. saatte S fazı bloğuna nedenolurken ve aynı etkiyi SPC212 hücre hatlarında 50 ve 100µM'lık dozlardagöstermiştir. Cisplatin'in 5 ve 10µg/ml tek doz uygulamalarında her iki hücre 24.saatte S fazında, 48. saatten sonra G2/M geçişinde tutuklanmışlardır. 50µg/ml'likcisplatin dozu hücrelerin her ikisini de 24 ve 48. saatlerde S fazında tutuklarken, 72.saatte bu durumun SPC111 hücrelerinde devam ettiği, ancak SPC212 hücrehatlarında 72. saatte G2/M geçişinde bir birikime neden olduğu gözlenmiştir. 5µg/mlCis+50µM Qu birlikteliğinin her iki hücre hattı içinde hücre döngüsü üzerindeki enetkili doz olduğu belirlenmiştir. tek dozlardan farklı olarak hücrelerin 48 saatboyunca S fazında tutuklandıkları gözlenmiştir. Apoptoz DNA laddering yöntemi iledeğerlendirilmiş, zamana ve doza bağlı olarak her iki hücre hattında tipikfragmentlenme gözlenmemiştir.vYaptığımız deneylerde kersetinin SPC111 hücrelerinde bifazik etkisi olduğuyani düşük dozlarda indükleyici, yüksek dozlarda ise inhibe edici olduğunu tespitedilmiştir. SPC212 hücre hatlarının kersetin ve cisplatine SPC111 hücre hatlarındandaha duyarlı olduğu, kersetin-cisplatin kombinasyonunun zamana ve doza bağlıolarak hücre proliferasyonunu inhibe ettiği gözlenmiştir.In our work we investigated the effects of a food originated compoundquercetin alone or in combination with a chemotherapeutic agent cisplatin onproliferative and apoptotic properties of mesothelioma cell lines SP111 and SPC212on dosage and time dependent manner. The effects of quercetin at 10-100µM andcisplatin at 0-50µg/ml were investigated at time intervals between 0-96 hours.In cell proliferation assays using SPC111 cell lines, quercetin stimulatedcellular proliferation below 50µM range whereas reduced growth rate was observedat 50 and 100µM, however, In SPC212 cell lines proliferation was inhibited at 10, 50and 100µM concentrations in dosage and time dependent manner. In both cell linescisplatin at 5, 10 and 100µM concentrations demonstrated either stationary orinhibitory effect on cellular proliferation depending on the drug dosage. In both celllines cell proliferation was inhibited at 72 hour at 5µg/ml cisplatin plus 50µg/mlquercetin and 10µg/ml cisplatin plus 50µg/ml quercetin combinations. In cell cycleanalyses 100µM quercetin caused S phase blockage in SPC111 cells at 48 hour whilethe same effect was observed at 50 and 100µM drug concentrations in SPC212 cells.At 5 and 10µg/ml single dosage applications of cisplatin both cell lines were arrestedat S phase at 24 hour and G2/M transition after 48 hour. Cisplatin 50µg/ml caused Sphase cell cycle arrest at 24 and 48 hours in both cell lines and proceeded until 72hour as like for SPC111 cells while SPC212 cells were accumulated at G2/Mtransition at 72 hour. 5µg/ml cisplatin plus 50µM quercetin combinations was foundto be most effective concentrations effective on cell cycle for both cell lines. Unlikefrom single dosage applications cells were arrested at S phase for 48 hour. In thisstudy apoptotic affects were evaluated by DNA laddering procedure and typicalladdering pattern were not observed for the two cell lines on a dosage and timedependent manner.viiOur experiments demonstrated biphasic effects of quercetin on SPC111 celllines, in other words at low dosages, quercetin stimulates cellular proliferation whileat high dosages it has inhibitory effect. SPC212 cell lines were shown to be moresensitive to quercetin and cisplatin treatment than SPC111 cells and combination ofquercetin and cisplatin inhibits cellular proliferation on a time and dosage dependentmanner.