DEK İzoformlarının (İzoform 1 ve İzoform 2) Birbiriyle Etkileşimlerinin Birlikte Çöktürme (Co- Immunoprecipitation) Yöntemiyle Araştırılması.

Abstract

DEK proteini, 375 aminoasitten oluşan, 43kDa boyuta sahip ve ilk olarak Akut Myeloid Lösemi (AML) hastalarında CAN proteini ile füzyon halinde tanımlanmış, büyük oranda hücre çekirdeğinde lokalize olan fakat hücre dışına da salgılanabilen bir proteindir. DEK geni ifadesi, hücre döngüsünün kontrolü dolayısıyla kanser oluşumunda kritik role sahip olan E2F transkripsiyon faktörünün pozitif kontrolü altındır. DEK geninin birçok kanser türünde aşırı ifade edildiği, ayrıca bir tümör baskılayıcı protein olan p53 ün destabilizasyonu ile de kanser hücrelerinde apoptozun indüklenmesini sağlayarak kanser oluşumunda rol oynadığı bildirilmektedir. DEK proteinin bilinen iki izoformu (protein DEK isoform 1 ve protein DEK isoform 2) bulunmaktadır. DEK isoform 1 proteininin kanser oluşumunun yanında hücre biyolojisinde de birçok yönden etkili olduğu bilinmektedir. Buna istinaden DEK in DNA replikasyonu, DNA tamiri, mRNA işlenmesi, transkripsiyonel düzenleme, hücre çoğalması, bazı hücre tiplerinin farklılaşması ile ilgili rolleri olabileceği konusunda fazlaca çalışma olmasına rağmen, bu proteinin bilinen iki izoformunun birbirleri ile etkileşimi olup olmadığı ve DEK isoform 2? nin ayrı olarak ne gibi fonksiyonlara sahip olabileceği konusunda literatürde herhangi bir çalışma bulunmamaktadır. Önerilen bu projede, DEK proteinine ait olan iki izoformunun, Hs27A insan stroma hücre hatlarından elde edilecek cDNA ların PCR ile çoğaltılarak ekspresyon vektörlerine aktarılması ve klonlanan DEK izoform 1 ve izoform 2?nin 293T hücrelerinde transfeksiyonu sağlanıp sentezlettirilerek birlikte immunopresipitasyon (co-immunoprecipitation, (Co-IP)) yöntemiyle iki proteinin birbirleri ile etkileşimlerinin olup olmadığının belirlenmesi amaçlanmıştır. Bu projeden elde edilecek veriler yürütücünün doktora tezinin bir bölümünü oluşturacak olup, DEK isoform 2?nin hücre biyolojisine, kanser oluşumuna veya engellenmesine olan etkisini gözlemlemeye yönelik gelecekteki çalışmaların da zeminini hazırlayacaktır.