Tüp Bebek İşleminde Kullanılmak Üzere Apoptotik Spermlerin Işık Mikroskobik Olarak Ayrıştırılması

Abstract

İnfertilite, çocuk sahibi olmak isteyen çiftlerin %20' sini etkileyen bir sağlık sorunudur. 'İntrasitoplazmik sperm enjeksiyonu' (ICSI), çiftlere bu amaçla, yaygın olarak kullanılan bir yardımla üreme tedavisi tekniğidir. ICSI'de en önemli adımlardan biri, sağlıklı bir embriyo ve sağlıklı bir yavrunun oluşması için en yüksek potansiyele sahip sperm hücresini seçmektir. Sperm seçim teknikleri ise, genellikle daha iyi motilite ve morfolojiye sahip bir sperm popülasyonu elde etmeyi amaçlar ki bu durum, bir spermin üreme potansiyelini tahmin etmek için yeterli değildir. İnfertil erkeklerde daha yüksek olduğu gösterilen ve embriyo gelişimi ve üreme kohortunu olumsuz etkilediği bilinen apoptotik spermlerin eliminasyonu da seçim stratejilerine dahil edilmelidir. Çalışmanın amacı, ICSI tedavisi sırasında, apoptotik olmayan canlı sperm hücrelerinin ışık mikroskobu ile seçimine olanak sağlayacak, ekstra ekipman, eğitim ve maliyet gerektirmeden yeni, kolay ve zararsız bir sperm seçim tekniği geliştirmektir. Bu amaçla, Annexin-V kaplı polistren boncuklar hazırlandıktan sonra, elde edilen boncuklar BALB-c farelerinden elde edilen sperm hücrelerine bağlanmış ve teknik en verimli bağlanma koşullarını elde etmek için optimize edilmiştir. Tekniğe 'Annexin-V kaplı polistren boncuk tekniği (APB-Tech)' adı verilmiştir. Tekniğin geçerliliği test etmek için, sonuçlar, iyi bilinen iki apoptoz belirleme tekniğinin (SCSA ve TUNEL) sonuçlarıyla karşılaştırılmıştır. Geliştirilen yöntem (ürün) in toksisitesini test etmek için ise `sperm sağkalım testi? ve embriyotoksisite analizleri (Mouse embryo assay- MEA) yapılmıştır. Yöntemin, TUNEL ve SCSA teknikleri ile benzer sonuçlara sahip olduğu gösterilmiştir. Sperm sağkalım testi (SST) ve embriyotoksisite (ICSI parametreleri) sonuçları, ürün kullanılan ve kullanılmayan gruplar arasında benzer bulunmuştur. Sonuçlarımız doğrultusunda geliştirilen yöntemin, mikroenjeksiyon sırasında doğal seleksiyona en yakın sperm hücrelerinin seçilmesini sağlaması ve böylece hem ICSI tedavi sonuçlarını olumlu yönde etkilemesi hem de çocukta oluşabilecek hastalık risklerini azaltması beklenmektedir. APB-Tech ile ilgili yapılacak insan çalışmaları ile, ICSI sonuçlarına ve yenidoğan sağlığı üzerine etkisi değerlendirilmelidir.