FLASH (Flıce-Assocıated Huge Proteın)'ın karaciğer kanserindeki gen ve protein ifadelerinin incelenmesi

Abstract

Karaciğer kanseri, ölüme sebebiyet veren kanserler sıralamasında erkeklerde 2. kadınlarda ise 6. sırada olup öne çıkan en yaygın tipi Hepatoselüler Karsinom (HCC)'dur. HCC oluşumunu tetikleyen etmenlerin başında viral hepatitler, aflatoksin zehirlenmeleri ve aşırı alkol tüketimi gelmektedir. Diğer kanser türlerinde olduğu gibi HCC tanısının ölümcül aşamalara gelmeden konulabilmesi için tümör oluşumunda rol alan gen ve proteinlerin seviyelerindeki değişimin anlaşılması gerekmektedir. Bu sebeple genotipik ve fenotipik açıdan farklı özellikler sergileyen dokuz HCC hücre hattı ile çalışılmıştır. Bu hücre hatlarında, hem pro – apoptotik hem de hücre döngüsünü ve canlılığını destekleyici rolleri bulunan FLASH/CASP8AP2 ifadelenmesi, RT-qPCR, immünfloresan ve immünhistokimya yöntemleriyle incelenmiştir. İmmünhistokimya analizleri için çoklu doku makrodizinleri kullanılmıştır. CASP8AP2 geni tüm hücre hatlarında ifadelenmekte olup bu hücreler arasında göze çarpan bir değişim gözlenmemiştir. Gen ifade düzeyleri, immünofloresanda elde edilen protein ifadelenmeleri ile kıyaslandığında sonuçların tutarlı olduğu saptanmıştır. Hem sağlıklı hem de çeşitli kanser dokularında yapılan immünhistokimya analizleri sonucunda sadece sağlıklı mide dokularında FLASH protein ifadelenmesine rastlanılmıştır.

Liver cancer is the second leading cause of cancer deaths in men and the sixth leading cause of cancer deaths in women. Hepatocellular Carcinoma (HCC) is the most common type among the liver cancers. Viral hepatitis, aflatoxin intoxication and excessive alcohol consumption are the leading factors triggering HCC development. As in the case for other cancer types, genes and proteins involved in tumor progression must be thoroughly investigated in order for HCC to be diagnosed before the disease reaches end-stage fatal status. For this purpose, nine different HCC cell lines exhibiting distinct genotypic and phenotypic traits are used in this study. FLASH protein encoded by CASP8AP2 gene was shown to play roles in apoptosis, cell cycle and cellular proliferation. Thus, its expression is investigated in HCC cell lines and tissues by RT-qPCR, immunofluorescence and immunohistochemistry. Immunohistochemical analyses were performed in multiple tumor tissue arrays as well. Although there has been CASP8AP2 expression in all HCC cell lines, we didn't observed marked changes in expression levels. Gene expression levels were in accordance with the protein levels obtained by immunofluorescence microscopy. According to the immunohistochemistry studies performed on both various normal and cancer tissues, FLASH protein expression was only detected in healthy stomach tissue samples.