Hibridoma tekniği kullanılarak karsinoembriyonik antijene özgül monoklonal antikor üretim çalışmaları

Abstract

Karsinoembriyonik antijen (CEA) kolorektal kanserlerde yaygın olarak kullanılan bir tümör belirleyicisidir. Bununla birlikte meme, akciğer, mide, pankreas, mesane, tiroid, karaciğer kanserlerinde ve bazı benign hastalıklarda serum CEA değerleri artış gösterebilir. Günümüzde anti-CEA monoklonal antikorlar, tek ya da diğer tümör belirleyicileri ile birlikte kolorektal kanserlerin tanısında oldukça etkili bir şekilde kullanılmaktadır. Bu çalışmada, CEA ile immunize edilen BALB/c farelerin serumlarındaki antikor seviyeleri belirli zaman aralıklarında tespit edildi. En yüksek antikor aktivitesi veren fare füzyon işlemi için kullanıldı. Füzyon sonrası spesifik antikor üreten hibrit hücreler dolaylı ELISA yöntemi ile belirlendi. Pozitif reaksiyon veren klonlara sınırlı seyreltme işlemi uygulanarak alt klonlama yapıldı. Elde edilen monoklonal antikorların özgünlüğü farklı proteinler kullanılarak yapılan çapraz ELISA aktivite testi ile belirlendi. Karsinoembriyonik antijene karşı yüksek özgünlükte anti-CEA monoklonal antikor üreten 6B?s 8Bğ ve 8Eı hibrit hücreler elde edildi. Bu hibrit hücrelerin immunoglobulin tiplerinin IgM olduğu saptandı. In vitro olarak serumlu ve serumsuz besiyerinde geniş ölçekte üretilen hibrit hücrelerin üst sıvılarına amonyum sülfat çöktürmesi yapıldı ve distile suya karşı diyaliz edilerek saflaştırıldı.Carcinoembryonic antigen (CEA) is a widely used tumor marker for c6%r.es&K^ cancers. As in colorectal cancers, serum CEA levels may also be elevated in carcinoma of the breast, lung, stomach, pancreas, bladder, thyroid, liver and some benign diseases. Currently, anti-CEA monoclonal antibodies, alone or in combination with other tumor markers, are effectively being used in the diagnosis of colorectal cancers. In this study, antibody levels in the sera of BALB/c mice immunized with CEA were detected at certain time intervals. The mouse giving the highest antibody activity was used for the fusion process. After the fusion, hybrid cells producing specific antibodies were determined by indirect ELISA. The clones showing positive reactions were subcloned by using limiting dilution procedure. The monospecificity of the monoclonal antibodies obtained by this means was determined by performing cross ELISA activity test using different proteins. Hybrids cells (6B7j 8B6 and 8Ei) producing high specific monoclonal antibody against CEA were obtained. It was then determined that immunoglobulin iso types of these hybrids cells were IgM. Supernatants of hybrid cells produced in vitro in large quantities in medium with or without serum were precipitated with ammonium sulfate and purified by dialysing against distilled water.