Multiple miyelom hücrelerinde lentiviral yöntemle DEK geni ifadesinin susturulması

Abstract

Multiple Miyelom (MM), plazma hücrelerinin klonal olarak anormal çoğalmasıyla oluşan, 6. kromozomun 6p22.3 bölgesinin amplifikasyonunu da içeren çok sayıda kromozomal anomalinin görüldüğü bir kanser türüdür. 6p22.3 bölgesinde yerleşim gösteren DEK onkogeni, bu kromozom bölgesinin amplifikasyonu sonucunda bazı solid kanser türlerinde aşırı miktarda ifade edilmektedir. Daha önceki çalışmalarımızda, analiz ettiğimiz MM hastalarının CD138pozitif MM hücrelerinde DEK ifadesinin 2-30 kat arasında azaldığı tespit edildi [Çakar T., 2014]. İlave olarak, analiz edilen MM hastalarının yaklaşık %10'unda DEK geninin amplifiye olmasına karşın DEK ifadesinin bu amplifikasyondan etkilenmediği ve bu hastalarda da DEK ifadesinin azaldığı belirlendi [Çakar T., 2014]. Bu tez çalışmasında, DEK geni ifadesinin lentiviral yöntemle kalıcı olarak baskılanmasının U266 MM hücre hattının morfolojisine, canlılığına, çoğalmasına ve kemoterapi ilacı Melphalan'a olan hassasiyetine etkileri analiz edildi. Elde edilen sonuçlar, iki farklı lentiviral shRNA ile DEK ifadesi baskılanan hücrelerde, kontrol grubu hücrelerine göre bölünme süresinin yavaşladığını ve kontrol hücreleri (sh-negatif) bölünmelerini 43 saatte tamamlarken, bu sürenin shDEK-B hücrelerinde 45 saate, shDEK-C hücrelerindeyse 51 saate uzadığını gösterdi. Sadece shDEK-C hücrelerinde gözlenen bölünme süresindeki bu uzamanın istatistiksel olarak anlamlı olduğu belirlendi (P?0.05). Giemsa ile boyanmış hücrelerin ışık mikroskobu analizleri hücrelerin benzer morfolojiye sahip olduklarını gösterdi. Kontrol hücreleri ve DEK ifadesi baskılanmış hücrelerde, MM hastalarının tedavisinde kullanılan Melphalan'a hassasiyetin değişmediği ve hücrelerin Melphalan varlığında çoğalmalarını durdurdukları tespit edildi. Bu veriler doğrultusunda, DEK ifadesinin U266 MM hücre hattında baskılanmasının, zaten yavaş olan hücre bölünme süresini biraz daha yavaşlattığı ancak hücre morfolojisi ve Melphalan hassasiyetini etkilemediği sonucuna varıldı. Bu tez çalışması Tübitak tarafından KBAG 212T108 no'lu 1001 projesi ile desteklenmiştir.Multiple myeloma (MM) is characterized by abnormal expansion of malignant plasma cells, representing several chromosomal abnormalities including the amplification of 6p22.3 chromosome region. DEK oncogene, located on chromosome 6p22.3, is overexpressed in several solid tumors due to amplification of chromosome 6 or 6p region. We previously showed that DEK expression is downregulated by 2-30 fold in CD138positive MM cells in our cohort of MM patients, without being affected by the amplification of DEK gene, which is observed in about 10 % of our cohort [Çakar T., 2014]. In this thesis, we aimed to analyze the affect of DEK knock-down on the biology of U266 MM cell line. Silencing of DEK expression by two different lentiviral sh-RNA contracts (shDEK-B and shDEK-C) resulted in about 2 hours (shDEK-B) to 8 hours (shDEK-C) increase in the doubling time, the later increase was statistically significant (P?0.05). Light microscopy analysis of Giemsa stained cells did not show any difference in morpghology of shDEK-B or shDEK-C cells compared with control sh-Negative cells. Melphalan treatment resulted in a similar response in the control and sh-DEK cells and induced growth arrest in all treated cells. In summary, our results suggest that the down regulation of DEK expression in U266 MM cells slightly increase the dobling time of the cells whereas it does not affect their morphology and Melphalan response. This work was supported by the Scientific and Technological Research Council of Turkey (TÜBİTAK) 1001 Grant (KBAG 212T108).