Helicobacter pylori CagA, VacA ve üreaz proteinlerinin peptik ülser hastalıklarının oluşumundaki rolleri ve H. pylori üreazının immobilizasyonu

Abstract

H. pylori peptik ülser hastalıklarına neden olan ajan olarak kabyl edilmektedir. H. py/or/'nin ülsere nasıl sebep olduğu tam bilinmese de ürettiği CagA, VacA ve üreaz enzimi en önemli zanlılar arasındadır. Türkiye'ye ait H. pylori suşlarının, cagA, vacA genlerinin ürünleri olan CagA, VacA proteinlerinin ve üreaz enziminin peptik ülser hastalıklarının oluşumunda etkileri araştırılmıştır. İstanbul Eğitim Hastanesi Endoskopi Ünitesinde H. py/o/fyi eradike etmek için rutin olarak kullanılan rejimin eradikasyon başarısına bakılmıştır. H. pylori üreazı ilk defa bir matrikse immobilize edilip, Km ve Vmax değerlerindeki değişim gözlenmiştir. 4471 hastanın bilgi formlarındaki bilgiler SPSS kullanarak analiz edilmiş, kliniğe gelen 66 semptomatik birey, ELISA ve biyopsi tabanlı testlerle incelenmiştir. 119 asemptomatik birey ELISA ile ve ELISA pozitif bireyler immunoblot ile test edilmiştir. 18 hastaya 1 hafta 3'lü tedavi rejimi uygulanmış olup (1 gr. amoksisilin, 500 mg metronidazol, 30 mg lansoprazol) tedavi öncesi ve 1, 12 ay sonrası biyopsi örnekleri toplanmıştır [5 adet biyopsi (birer adet antrum küçük ve büyük kurvaturdan, birer adet korpus küçük kurvatur ve büyük kurvaturdan ve bir adet insusi angularisten) histoloji testi için, birer adet biyopsi kültür, CBO {Campylobacter Benzeri Organizma) ve PZR (Polimeraz Zincir Reaksiyonu) testleri için]. Tedavi öncesi, 1,2,6 ve 12 ay sonrası serum örnekleri toplanmıştır. H. pylori üreaz enzimi yeni bir membrana [PS-DVB- PGL (Polistier-dividobenzim-poligluteraldehit)] immobilize edilmiştir. 4471 bireyin % 62.7'si CBO testi sonuçlarına göre H. pylori pozitif bulunmuştur. Gastritli, duodenal ülserli, mide ülserli ve normal bireylerdeki CBO pozitif oranı sırayla, % 60, 74.8, 62.8, ve 54.8 olarak bulunmuştur (P<0,05). Duodenal ülserli bireylerin % 65.6'sının ve gastritli bireylerin % 42.8'i erkektir (P<0.01 ). Peptik ülserli hastalarda kusma semptomunun daha fazla olduğu belirlenmiştir. H. pylori, sigara, alkol, NSAİİ (Non-steroid anti- enflamatuvar İlaçlar) ve aspirinin peptik ülser için risk faktörleri olduğu görülmüştür. Semptomatik bireylerin % 82'si, asemptomatiklerin % 64'ü ELISA testi ile H. pylori pozitif bulunmuştur. 30 semptomatik, 40asemptomatik Hp pozitif birey immunoblot testine alınmıştır. Jmrnunoblotl'' testine alınan bireylerde CagA, VacA ve 37, 35, 30, 19.5 kD'luk proteinlere karşı antikor oranları tespit edilmiştir. Buna göre semptomatik bireylerde anti- CagA, anti-VacA ve anti-37, 35, 30, 19.5 kD antikor oranları sırasıyla %.8Ö,- 70, 70, 63, 90 ve 63, asemptomatiklerde ise sırasıyla % 83, 65, 75, 75, 98 ve. 90 olarak bulunmuştur. CagA ve VacA proteinlerine karşı antikor prevelansı asemptomatik ve semptomatik bireylerde oldukça fazladır. Takip programına katılan tüm bireyler H. pylori pozitif bulunmuş, bir yıl sonunda % 61 'inde eradikasyon gözlenmiştir. H. pylori midenin tüm bölgelerinde görülmüştür. 8 hastada atrofi, 4 kişide ise intestinal metaplazi bulunmuştur. Mononüklear hücre infiltrasyonu ve nötrofil infiltrasyonu skorları bir yılda düşerken, atrofi ve intestinal metaplazininkilerde anlamlı bir düşüş görülmemiştir. Bakterinin eradike olduğu bireylerdeki ELISA değerleri % 67'lik düşüş göstermiştir. 1 1 (% 61.1) kişide cagA, 17'sinde (% 94.4) vacAsla, 10'unda (% 55.6) vacAml geni tespit edilmiştir. cagA ve vacAml genleri duodenal ülser hastarında anlamlı olarak daha yoğun bulunmuştur. H. pylori üreaz enzimi membran polimere başarılı bir şekilde immobilize edilmiştir. Serbest ve immobilize enzimin kinetik parametreleri sırayla; Vmax: 5.15 ve 3.35 jj.mol.dak."1.mg"1, Km: 0.13 ve 0.70 mM olarak bulunmuş, serbest enzim pH 8'de ve 37°C'ta maksimum aktivite göstermiştir, immobilize enzim aktivitesi 28 ml/dakikalık debide en üst düzeye ulaşmıştır.^ ; v ^ H. pylori is considered to be an agent causing peptic ulcer diseases. Although it is still unknown how it causes ulcer, CagA, VacA & urease as its products are the most important suspects. The roles of cagA, vacA and their products and urease of H. pylori in peptic ulcer diseases in a Turkish population was investigated. In the study, the success of the regimen used in Istanbul Education Hospital was checked. A native H. pylori urease was extracted, kineticaly analysed and immobilized to a novel membran matrix called PS-DVB-PGL. Data from 4471 patients' clinic records were analyzed with SPSS. 66 symptomatic subjects were examined for Hp by ELISA & biopsy based tests. 119 asymptomatic subjects were also tested by ELISA. Subjects with Hp infection were immunoblotted. 18 patients were given triple drug therapy during two weeks. Biopsies were collected before, at 1 & 12 months after treatment: 5 biopsies for histology (lesser & greater curvatures of the antrum and body & incisura anguiaris) and another 3 for CLO, PCR to amplify cagA, cagE and vacA genes and culture. Serum samples were also collected before, at 1, 2, 6 and 12 months after therapy. Hp urease was extracted and immobilized onto a novel porous membrane. 62.7 % of 4471 subjects were CLO positive. CLO positivity of gastrit, duodenal and gastric ulcer, normal subjects were respectively 60, 74.8, 62.8, 60.0 and 54.8 % (PO.05). 65.6 % of subjects with duodenal ulcer were male and 42.8 % of subjects with gastrit were male (P<0.01). Smoking, NSAID (Non-steroid Anit-inflamatory Drug), aspirin, alcohol intake were risk factors for peptic ulcer. The number of vomiting subjects was higher in peptic ulcer. 82 % of symptomatic subjects and 64 % of asymptomatic subjects were Hp+ by ELISA. 30 from symptomatic subjects and 40 from asymptomatic subjects, all of whom were Hp+, were analyzed by immunoblotting. Anti- CagA, anti- VacA, anti-37, 35, 30, 19.5 kD antibodies were found in 80, 70, 70, 63, 90 and 63 % of symptomatic subjects whereas those were found in 83, 65, 75, 75, 98 and 90 % of asymptomatic subjects, respectively. Antibodies against CagA, VacA were prevelant in both groups. All patients arrended the follow-. JE'*4*- *-fc..-£>. ' up program were H. pylori positive. H. pylori eradication was achieved in 6T"%^Xi of patients. H. pylori was detected in all 5 regions of the stomach.- Atrophy and intestinal metaplasia were seen in 8 and 4 patients respectively, the. score corresponding to chronic gastritis declined progressively after H. pylori'*" eradication whereas the scores corresponding to intestinal metaplasia and atrophy did not show any significant changes during one year. The ELISA values of patients whose H. pylori was eradicated showed an 67 % decrease. The cagA, vacA-sIa, and vacA-m1 genes were detected in 11 (61.1%), 17 (94.4 %), and 10 (55.6 %) of 18 patients respectively. cagA and vacA-m1 were significantly associated with duodenal ulcer. H. pylori urease was successfully immobilized onto a novel porous membrane. The Km values were 0.13 and 0.7 mM for the free and the immobilized enzymes, respectively. The Vmax values were 5.15 and 3.35|imol.dak."1.mg~1 for the free and the immobilized enzymes, respectively. Free enzyme showed maximum activity at pH 8, and 37°C. Immobilized enzyme showed maximum activity at a flow rate of 28 ml/min.