Optimization of the recombinant PD-1 protein expression in transiently transfected mammalian cell lines

Abstract

İnsan PD-1 proteini, kanserle ilgili analitik amaçlar için kullanılabilecek bir proje çıktısı ürün olarak üretildi. PD-1 proteini, T hücrelerinin aktivasyonunu inhibe edebilir ve böylece kanserli hücrelerin çoğalmasına yol açabilir. PD-1 proteinini bloke ederek kanserli hücrelerin gelişimini engelleyebilen monoklonal antikor bazlı ilaçlar piyasada yerini almıştır. Verilen bilgiler doğrultusunda proje çıktısı olarak ifade edilen PD-1 proteini, monoklonal antikorların biyo-analitik testlerinde ve dolayısıyla kanser tedavisi çalışmalarında kullanılabilecek potansiyel bir nihai ürün olma potansiyeline sahiptir. Söz konusu yüksek lisans tezi, geçici olarak transfekte edilmiş HEK293T (İnsan Embriyonik Böbrek) hücre hattında insan PD-1 proteininin ifade değerlerinin optimizasyonunu ve analitik denemelerini kapsamaktadır. Transfeksiyon sonrası hücre canlılığı, hücre sayacı cihazı ile gösterildi, protein ifadeleri floresan mikroskobu kullanılarak GFP ışımasına göre kontrol edildi ve görüntü analiz yazılımı kullanılarak nicelendirildi. Verim değerlerine göre, veriler en iyi parametreleri bulmak için "deney tasarımı" araçları kullanılarak karşılaştırıldı ve gruplandırıldı. Optimize edilmiş transfeksiyon parametreleriyle insan PD-1 proteinini ifade eden hücreler, bir akış sitometri cihazı ve bir ELISA test kiti kullanılarak bloke edici antikorun bağlanma özelliğini taramak için kullanıldı.The human PD-1 protein was produced as a project output that can be used for cancer-related analytical purposes. PD-1 is one of the most popular protein that can able to inhibit the activation of T cells thus resulting in the proliferation of cancerous cells. Monoclonal antibody-based drugs which can block the development of cancerous cells by blocking the PD-1 protein, have taken their place on the market. In line with the given information, the PD-1 protein, which was expressed as a project output, was a potential final product that can be used in the bioassay development for monoclonal antibodies and therefore in cancer treatment studies. The mentioned thesis was based on optimization of expression and analytical potential of human PD-1 protein from the transiently transfected HEK293T (Human Embryonic Kidney) cell line. Cell viability after transfection was demonstrated by cell counter device, protein expression was checked according to GFP luminescence by using fluorescent microscopy, and quantified by using image analysis software. According to yield values, the data was investigated by using "design of experiment" tools to figure out the effects of parameters for higher expression rates. The cells expressed human PD-1 with optimized transfection parameters were used to screen the binding property of blocking antibody, by using a flow cytometry device and an ELISA test kit.